摘要：為了驗證柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)頂膜抗原1結(jié)構(gòu)域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,E tAMA1-DⅠ)與棒狀體頸部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作關(guān)系,以柔嫩艾美耳球蟲子孢子cDNA為模板,PCR擴(kuò)增出492 bp的E tAMA1-DⅠ片段和1395 bp的E tRON2片段,并與pGEM-T-easy載體連接構(gòu)建相應(yīng)重組質(zhì)粒。獲得的陽性重組質(zhì)粒及雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)的真核表達(dá)載體pBiFC-VN155和pBiFC-VC155用E c oRⅠ和B g I II進(jìn)行雙酶切,將E tAMA1-DⅠ、E tRON2分別與pBiFC-VN155、pBiFC-VC155連接,構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pBiFC-VN155-E tAMA1-DⅠ和pBiFC-VC155-E tRON2。將2個真核重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),經(jīng)間接免疫熒光鑒定,可在BHK細(xì)胞中成功表達(dá)。將2個真核重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至BHK細(xì)胞中,同時將pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155、pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(delta)VC155共轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中分別作為陽性和陰性對照組。BiFC結(jié)果發(fā)現(xiàn)真核重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組和陽性對照組的BHK細(xì)胞均產(chǎn)生綠色熒光,而陰性對照組無熒光,表明E tAMA1-DⅠ與E tRON2蛋白之間存在互作關(guān)系。本研究結(jié)果為深入研究E tAMA1及E tRON2在球蟲入侵過程中的功能與作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。