摘要：鹵代烷烴脫鹵酶(HLD)是一類能降解鹵代脂肪化合物的酶,為今后將藻類HLD用 于環(huán)境中鹵素化合物的降解提供資料,本實(shí)驗(yàn)利用生物信息學(xué)、熒光定量PCR和pET28a 表達(dá)系統(tǒng)對(duì)大型紅藻龍須菜中HLD的酶學(xué)特性、轉(zhuǎn)錄表達(dá)和原核表達(dá)進(jìn)行了研究。生物 信息學(xué)分析結(jié)果顯示,龍須菜中HLD基因(記為GlHLD)開放閱讀框長(zhǎng)969 bp,理論分子量 約為36.33 ku,等電點(diǎn)約為5.53;該GlHLD序列與繩狀龍須菜的一條HLD序列(PXF45553.1) 完全一致,與繩狀龍須菜和皺波角叉菜等紅藻優(yōu)先聚類。熒光定量PCR結(jié)果表明,高溫 下底物1,2-二氯乙烷和植物激素水楊酸可促進(jìn)GlHLD基因的表達(dá),其表達(dá)量分別為常溫 組的3.64、2.64和2.43倍。GlHLD與pET28a質(zhì)粒構(gòu)建的重組載體在大腸桿菌BL21(DE3)中 成功表達(dá)出具有脫鹵酶活性的蛋白;該蛋白的最佳誘導(dǎo)條件為16 °C、0.1 mmol/L IPTG誘 導(dǎo)12 h,最后用鎳柱對(duì)GlHLD蛋白進(jìn)行了初步純化。本研究為進(jìn)一步了解藻類HLD家族 及獲得高純度HLD酶奠定了基礎(chǔ)。