人血管緊張素Ⅱ2型受體AT2R重組細(xì)胞系的構(gòu)建與鑒定

陳惠瑩; 毛瑩瑩; 裴娜娜; 顏仁和; 萬(wàn)鵬飛; 李紅衛(wèi) 南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)與生物技術(shù)學(xué)院; 廣東廣州510515; 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科; 廣東廣州510163; 廣州伯尼茲生物科技有限公司; 廣東廣州510663

hat2r
compound21
慢病毒
穩(wěn)定細(xì)胞系
前列腺癌

摘要：目的:構(gòu)建人血管緊張素Ⅱ2型受體(hAT2R)過(guò)表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系,探討AT2R激動(dòng)劑Compound 21等對(duì)前列腺癌細(xì)胞的作用及機(jī)制.方法:構(gòu)建含hAT2R基因的慢病毒表達(dá)載體pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包裝成慢病毒.將重組慢病毒載體pLV-CMV-IRES-eGFP-hAT2R感染前列腺癌細(xì)胞,并利用流式細(xì)胞術(shù)篩選出單克隆細(xì)胞株,RT-PCR及Western blot方法檢測(cè)重組細(xì)胞系中hAT2R表達(dá)水平,使用AT2R激動(dòng)劑CGP42112檢測(cè)受體功能.結(jié)果:重組慢病毒載體感染PC-3、DU145前列腺癌細(xì)胞24 h后均能觀察到eGFP表達(dá),用流式細(xì)胞術(shù)分別篩選出單克隆細(xì)胞株,RT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示目的基因hAT2R在兩株重組細(xì)胞系中表達(dá)顯著升高,CGP42112處理24 h后,重組細(xì)胞系細(xì)胞活力較正常PC-3、DU145細(xì)胞顯著降低.結(jié)論:成功構(gòu)建hAT2R過(guò)表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系.

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