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抗巨細胞病毒早晚期抗原單克隆抗體制備及在病毒培養物鑒定中的初步應用

崔京濤; 閆文娟; 張偉紅; 王巧鳳; 許少俠; 謝宏杰; 倪安平 中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院檢驗科; 北京100730
  • 巨細胞病毒
  • 單克隆抗體
  • 即刻抗原
  • 早期抗原
  • 晚期抗原

摘要:目的制備抗CMV早晚期抗原單克隆抗體并在病毒培養物鑒定中初步應用。方法CMV感染MRC-5細胞24h、48h和72h后甲醛滅活的可溶性抗原免疫BALB/e小鼠,小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞NS-1進行融合。酶免法篩查陽性雜交瘤并有限性稀釋法進行克隆。免疫熒光及印跡對篩選后的克隆進行鑒定,最終獲得的雜交瘤制備腹水并使用ProteinG進行純化。純化后單抗應用于CAP室間質評標本以及臨床標本CMV培養物的鑒定。結果3只小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合后初步篩查出約110株陽性克隆。剔除與其它抗原有交叉反應、抗體效價低、非全覆蓋早晚期抗原的克隆最終獲得抗CMV單抗雜交瘤1株,即2385-1。免疫熒光顯示2385-1株單抗與CklV感染后3h-120h的MRC-5細胞均反應,即覆蓋即刻、早期和晚期抗原。免疫印跡試驗顯示2385-1株單抗與CMV抗原25KD-50KD之間的5個蛋白條帶結合。2385-1株單抗免疫球蛋白亞型為IgGl。ProteinG純化腹水后的單抗效價≥1:12800。純化單抗染色鑒定6份室間質評及10份臨床標本CMV培養物全部符合。結論初步應用顯示制備的抗CMV早晚期抗原單克隆抗體性能良好。

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