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擬南芥AtGrp7RRM結(jié)構(gòu)域的純化及其結(jié)構(gòu)與結(jié)合的初步分析(英文)

遲秀娟; 喬曉亞; 劉穎; 劉惠麗; 陳雷; 王際輝; 艾選軍 大連工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院; 遼寧大連116034; 潔凈能源國家實驗室(中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所); 遼寧大連116023; 國家艾滋病性病防治中心; 病毒與免疫研究室; 北京102206; 波譜與原子分子物理國家重點實驗室、武漢磁共振中心(中國科學(xué)院武漢物理與數(shù)學(xué)研究所); 湖北武漢430071
  • 快速稀釋
  • atgrp7
  • 結(jié)合分析

摘要:富含甘氨酸的RNA結(jié)合蛋白AtGrp7是擬南芥(Arabidopsis thaliana)調(diào)節(jié)生物鐘負反饋回路的組分.在使用常規(guī)方法純化AtGrp7 RRM結(jié)構(gòu)域的初始試驗中,觀察到煙草蝕紋病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA識別基序(RRM)結(jié)構(gòu)域的紫外吸收峰為蛋白和雜質(zhì)的混合信號峰.為解決常規(guī)純化中的雜質(zhì)問題,對AtGrp71-90應(yīng)用了變性-復(fù)性兩步純化方法.AtGrp7 RRM結(jié)構(gòu)域的1H-15N HSQC指紋譜和CS-Rosetta模型結(jié)構(gòu)表明快速稀釋重折疊后其結(jié)構(gòu)完全恢復(fù).等溫滴定量熱法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定實驗進一步證實,重折疊后AtGrp71-90 RRM結(jié)構(gòu)域具有正確結(jié)合RNA/DNA的功能.

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波譜學(xué)

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主管單位:中國科學(xué)院;主辦單位:中國科學(xué)院武漢物理與數(shù)學(xué)研究所

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