朱砂葉螨幾丁質酶TecCht1基因的原核表達與純化
李博; 洪鵬; 沈宏亮; 楊金; 卜春亞 北京農學院生物科學與工程學院/農業部華北都市農業重點實驗室; 北京102206
- 朱砂葉螨
- 幾丁質酶
- 原核表達
- 純化
摘要：【目的】朱砂葉螨是世界范圍廣泛分布的重要經濟害螨,害螨防治十分困難.而幾丁質酶是昆蟲體內幾丁質代謝中分解幾丁質的關鍵酶,在更替新舊表皮和降解圍食膜中起著重要的作用,幾丁質酶是潛在的螨害生物防治靶標.本研究對朱砂葉螨幾丁質酶TecCht1進行原核表達和純化.【方法】克隆朱砂葉螨TecCht1基因的催化結構域,連接到pColdⅡ載體上,構建pColdⅡ/TecCht1重組表達載體,在大腸桿菌中進行高效表達,采用鎳柱純化目的蛋白,并進行Western Blot檢測.【結果】TecCht1在pColdⅡ載體上成功高水平表達,確定最佳誘導表達時間為24h.對TecCht1進行大量表達和純化,經Western Blot驗證,獲得純度較高的目的蛋白.【結論】實現TecCht1體外高效原核表達,獲得大量的TecCht1重組蛋白.
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