Vip3Aa10與甜菜夜蛾刷狀緣膜囊泡的結合特性
李婷; 張淑臣; 申曉鴻; 師光祿; 劉京國 北京農學院植物科學技術學院; 北京102206; 北京農學院生物科學與工程學院/農業部華北都市農業重點實驗室; 北京102206
- vip3aa10
- 甜菜夜蛾
- 刷狀緣膜囊泡
- 殺蟲活性
摘要：【目的】營養期殺蟲蛋白Vip3A是一種由蘇云金芽孢桿菌在對數生長期產生的新型殺蟲毒素.Vip3A與敏感昆蟲中腸上皮細胞的結合是其發揮殺蟲活性的關鍵步驟.為進一步探究Vip3A毒素的殺蟲機理,研究Vip3Aa10與甜菜夜蛾刷狀緣膜囊泡(BBMVs)的結合特性.【方法】在大腸桿菌中用IPTG誘導表達Vip3Aa10,用親和層析和離子交換層析的方法純化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T對甜菜夜蛾的殺蟲活性,用免疫印跡法和配體印跡法分析Vip3Aa10-T與甜菜夜蛾BBMVs的結合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的結合蛋白.【結果】Vip3Aa10-T與Vip3Aa10前毒素對甜菜夜蛾的殺蟲活性很高.Vip3Aa10-T在pH8.0時更容易與甜菜夜蛾BBMVs結合,并且能夠與非敏感性昆蟲黃粉蟲BBMVs結合.在相同pH條件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易與甜菜夜蛾BBMVs結合.Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4條結合蛋白,其分子量分別為80、38、31和22kDa.【結論】活化的Vip3Aa10與甜菜夜蛾BBMVs的結合是pH依賴性的,并且能與BBMVs上的4個蛋白結合.
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